Обмен опытом

Внутрилабораторный контроль качества неколичественных методов ИФА по частоте выявления искомых компонентов

И.Г. Нетесова, канд. биол. наук, нач. отделения иммуноферментного анализа гепатита В

Л.А. Мостович, научн. сотр.

И.В. Шумаков, микробиолог

О.Н. Ястребова, начальник отделения ИФА гепатита C

О.А. Ярославцева, ст. бактериолог

АО «Вектор-Бест», Новосибирск

Внутрилабораторный контроль качества (ВКК) обязателен для всех видов исследований, выполняемых в лаборатории. Правила ВКК количественных исследований приводят нормативные документы [1]. Для неколичественных методов применяют оценку по частоте обнаружения с их помощью искомых компонентов биоматериалов, включая компоненты, характерные (по морфологии, химическому или биологическому сродству с определенными хромофорами, флуорофорами, антителами) для специфических форм патологии, для диагностики которых предназначен данный вид исследования [2]. Ранее мы писали о возможности построения р-карт для ВКК по частоте выявления маркера [3].

В проекте «Организация внутрилабораторного контроля качества неколичественных методов ИФА в лаборатории» по частоте выявления лабораторных показателей (маркеров) – поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) – участвовали 36 лабораторий: Курской области (3 лаборатории), Пензенской области (21), Приморского края (8), Республики Бурятии (4 лаборатории). Для лабораторий был разработан шаблон «частота выявления маркера». В шаблон следовало внести ретроспективные данные хотя бы 20 аналитических серий и указать, сколько образцов исследовали и сколько получили положительных результатов первичного выявления HBsAg в каждой аналитической серии. Лаборатории Приморского края заполнили еще один шаблон – с ретроспективными данными аналитических серий, в которых исследовались образцы на наличие анти-ВГС.

Р-карты частот выявления HBsAg и анти-ВГС строили согласно [4]. Достоверность различий между двумя выборками вычисляли с помощью U-критерия Манна – Уитни для малых выборок (http://www.psychol-ok.ru/statistics/mann-whitney/).

Применение оценки частоты выявления HBsAg для организации внутрилабораторного контроля качества

Для проведения ВКК по частоте обнаружения HBsAg использовался метод построения контрольных карт для альтернативных данных. Альтернативные данные в настоящей работе – наличие или отсутствие HBsAg в каждом образце крови рассматриваемой аналитической серии. На основании этих данных производится подсчет числа первично положительных образцов, содержащих HBsAg, из числа исследованных. Сотрудники лабораторий-участниц внесли ретроспективные сведения в шаблоны «частота выявления маркера».

Данные 36 шаблонов представлены в табл. 1. Число аналитических серий варьировало от 20 до 61, в среднем 30. Всего исследованы в 1072 аналитических сериях 61 038 образцов, 1215 образцов определены как первично положительные, содержащие HBsAg. Средняя частота выявления HBsAg по данным 1072 серий составила 2%.

Таблица 1

Данные шаблонов «частота выявления HBsAg» 36 лабораторий – участниц проекта

Лаборатория	Частота выявления HBsAg, %	Число анали-тических серий	Из них без первично положи-тельных результатов	Доля аналитических серий без положи- тельных результатов, %	Среднее число исследованных образцов в аналити-ческой серии	Всего исследовано образцов	Всего первично положи-тельных образцов
1	0,9	29	15	52	77	2243	20
2	0,8	28	13	46	71	1976	16
3	0,4	25	22	88	44	1105	4
4	1,6	20	3	15	85	1708	27
5	2,6	29	22	76	11	310	8
6	2,2	29	14	48	33	956	21
7	1,6	29	9	31	84	2435	40
8	0,7	29	20	69	67	1939	14
9	1,3	29	13	45	67	1937	25
10	1,3	29	20	69	24	702	9
11	0,5	34	21	62	90	3067	16
12	0,3	30	26	87	48	1434	4
13	2,1	29	3	10	110	3176	66
14	1,4	20	11	55	41	829	12
15	1,5	29	18	62	36	1033	15
16	0,3	24	20	83	91	2184	6
17	0,4	29	24	83	66	1907	7
18	3,7	56	0	0	77	4288	158
19	1,9	29	26	90	5	159	3
20	1,8	29	15	52	33	949	17
21	1,5	29	8	28	83	2398	35
22	6,2	22	4	18	41	904	60
23	0,9	24	20	83	11	268	4
24	6,3	24	8	33	25	605	38
25	4,1	45	4	9	56	2502	102
26	2,3	29	16	55	60	895	20
27	1,8	40	13	33	76	3053	52
28	4,0	29	4	14	53	1537	71
29	2,3	61	23	38	44	2674	62
30	1,5	27	6	22	68	1830	27
31	3,5	21	0	0	76	1595	56
32	3,1	30	7	23	61	1830	57
33	3,7	43	21	49	23	972	36
34	1,5	20	4	20	130	2600	38
35	2,0	22	0	0	85	1880	38
36	2,7	21	9	43	72	1158	31
Среднее	2	30	13	44	59	1696	34
Сумма		1072	462			61 038	1215

Были построены 36 р-карт частот выявления HBsAg. Данные каждой серии вносились подряд как отражающие непрерывный ход производственного процесса [4]. На рис. 1 приведена р-карта по данным первых 20 серий из лаборатории № 18, на карту нанесены частоты последующих аналитических серий – с 21-й по 56-ю. Можно видеть отклонение частоты выявления маркера за верхнюю контрольную границу +3s.

Рис. 1. Р-карта частот выявления HBsAg в первых 20 установочных сериях шаблона «частота выявления маркера» из лаборатории № 18. Нанесены частоты серий с 21-й по 56-ю

Выход вычисленной частоты выявления HBsAg за верхнюю контрольную границу +3s в 20 аналитических сериях, используемых для построения р-карт, отмечен в 12 (33%) р-картах, не было ни одного отклонения за нижнюю контрольную границу -3s. В 1 р-карте было 2 выброса, в остальных 11 – по 1 выбросу за верхнюю контрольную границу +3s. Если контрольная карта строится впервые, «то часто оказывается, что процесс статистически неуправляем. Контрольные границы, рассчитанные на основе данных такого процесса, будут иногда приводить к ошибочным заключениям, поскольку они могут оказаться слишком широкими» [4].

Прежде чем устанавливать постоянные параметры контрольных карт, необходимо привести процесс в статистически управляемое состояние.

При проведении установочных серий, данные которых используются для построения р-карты, необходимо использовать контрольный материал для слежения за стабильностью процесса [5].

Построенные по ретроспективным данным р-карты частот выявления HBsAg можно использовать для дальнейшего оперативного контроля в 24 (67%) из 36 (100%) лабораторий – участниц проекта.

Аналитические серии без первично положительных результатов выявления HBsAg

HBsAg выявлялся хотя бы в одном образце во всех аналитических сериях в 3 (8%) из 36 лабораторий. В остальных 33 лабораториях доля серий без первично положительных результатов варьировала от 9 до 90% (табл. 1). HBsAg не был выявлен ни в одном из образцов в 462 (43%) из 1072 (100%) аналитических серий.

В 16 лабораториях доля аналитических серий, в которых HBsAg не выявлялся, составляла от 0 до 40%. Среднее число образцов для исследования в одной серии – 72 ± 26 (X_ср ± s). В 20 других лабораториях доля серий, в которых HBsAg не был выявлен, варьировала от 40 до 90%, среднее число образцов для исследования в одной серии – 48 ± 26 (X_ср ± s). Вычисленный U-критерий Манна – Уитни, позволяющий оценить различия между двумя малыми выборками, составил U_эмп = 84,5 при U_крит р ≤ 0,01 = 87, различия значимы. Это означает, что в 16 лабораториях с долей аналитических серий без положительных результатов от 0 до 40% в одно исследование берется достоверно больше образцов (в среднем 72), чем в 20 лабораториях с долей аналитических серий без положительных результатов от 40 до 90% (в среднем 48).

Организация ВКК по частоте обнаружения лабораторного показателя предполагает, что маркер выявляется. То есть во всех аналитических сериях должны быть первично положительные результаты его обнаружения. Если в большинстве серий маркер не обнаружен, то сложно проводить ВКК по частоте его выявления, т. к. невозможно отличить истинно отрицательные и ложноотрицательные результаты. В этом случае необходим контрольный материал, содержащий маркер в низкой концентрации. Например, МИНИпол-2 (АО «Вектор-Бест»), который позволит подтвердить аналитическую достоверность исследования и принять все первично отрицательные результаты как истинно отрицательные, не содержащие маркер [5].

Таким образом, ВКК по частоте выявления HBsAg выполним при условии выявления этого маркера в большинстве аналитических серий, что можно достигнуть путем увеличения числа образцов в каждой аналитической серии хотя бы до 72.

Применение оценки частоты выявления анти-ВГС для организации внутрилабораторного контроля качества

Получено 8 заполненных шаблонов «частота выявления маркера», данные внесены в табл. 2. Число аналитических серий, в которых исследовался маркер, варьировало в 8 шаблонах от 21 до 61, в среднем 35. Средняя частота выявления анти-ВГС по данным 280 аналитических серий составила 10%, т. е. в 5 раз выше средней частоты выявления HBsAg. Всего исследовано в 280 сериях 14 167 образцов, 1373 образца определены как первично положительные, содержащие анти-ВГС. Минимальная частота выявления анти-ВГС – 4% в лаборатории № 27, максимальная – 24% в лаборатории № 33.

Были построены 8 р-карт частот выявления анти-ВГС. На рис. 2 приведена р-карта по данным первых 20 аналитических серий из лаборатории № 29. На карту нанесены частоты последующих серий – с 21-й по 41-ю. При анализе карты можно отметить отсутствие отклонений за контрольные границы ±3s.

Выход частоты выявления анти-ВГС за верхние контрольные границы +3s в 20 установочных сериях, используемых для построения р-карт, отмечен в 3 (38%) р-картах лабораторий № 26, 28, 33, что указывает на случайные ошибки при проведении анализа на анти-ВГС в этих лабораториях. Не обнаружено ни одного отклонения за нижние контрольные границы -3s.

Таблица 2

Данные шаблонов «частота выявления анти-ВГС» 8 лабораторий – участниц Приморского края

Лаборатория	Частота выявления анти-ВГС, %	Число аналитических серий	Из них без первично положи-тельных результатов	Доля аналитических серий без положи-тельных результатов, %	Среднее число исследо- ванных образцов в аналити-ческой серии	Всего исследовано образцов	Всего первично положи-тельных образцов
26	8	29	4	14	31	895	68
27	4	41	2	5	75	3078	110
28	14	29	0	0	53	1537	216
29	12	61	1	2	44	2674	323
30	10	27	0	0	68	1827	189
31	9	21	0	0	77	1621	142
32	8	29	1	3	61	1765	142
33	24	43	3	7	18	770	183
Среднее	10	35	1	4	53	1771	172
Сумма		280	11			14 167	1373

Рис. 2. Р-карта частот выявления анти-ВГС в первых 20 аналитических сериях шаблона «частота выявления маркера» из лаборатории № 29. Нанесены частоты серий с 21-й по 41-ю

Построенные по ретроспективным данным р-карты частот выявления анти-ВГС можно использовать для дальнейшего оперативного контроля в 5 (63%) из 8 (100%) лабораторий.

Аналитические серии без первично положительных результатов обнаружения анти-ВГС

Антитела к ВГС выявлялись хотя бы в одном образце во всех аналитических сериях в 3 (38%) из 8 (100%) лабораторий. В остальных 5 лабораториях доля серий без первично положительных результатов выявления анти-ВГС варьировала от 2 до 14% (табл. 2). Маркер анти-ВГС не выявлен ни в одном из образцов в 11 (4%) аналитических сериях из 280, что в 10 раз меньше показателя для HBsAg (43%).

В 2 лабораториях с долей аналитических серий, в которых маркер не выявлялся, 7 и 14%, среднее число образцов для исследования в одной аналитической серии в лаборатории составило 25 ± 9 (X_ср ± s). В 6 лабораториях с долей аналитических серий без положительных результатов от 0 до 5% среднее число образцов для исследования в одной аналитической серии в лаборатории составило 62 ± 12 (X_ср ± s). Вычисленный U-критерий Манна – Уитни, позволяющий оценить различия между двумя малыми выборками, составил для среднего числа образцов в одно исследование в аналитической серии в 2 и 6 лабораториях U_эмп = 0 при U_крит р ≤ 0,05 = 0, различия значимы. Это значит, что в 6 лабораториях с долей аналитических серий без положительных результатов от 0 до 5% в одно исследование берется достоверно больше образцов (в среднем 62), чем в 2 лабораториях с долей аналитических серий без положительных результатов от 7 до 14% (в среднем 25).

Фактически видны те же закономерности, что и при анализе связи числа исследуемых образцов и доли аналитических серий без положительных результатов обнаружения HBsAg. При этом средняя частота выявления анти-ВГС (10%) в 5 раз выше средней частоты выявления HBsAg (2%), а доля аналитических серий без положительных результатов в 10 раз ниже, поэтому ВКК по частоте обнаружения анти-ВГС проводить гораздо проще. Контрольный материал с низким содержанием маркера типа МИНИпол-2 следует использовать только при повторном исследовании образцов аналитической серии без первично положительных результатов.¹

Список использованной литературы

1. Нетесова И.Г., Бобкова М.Р. Проведение внутрилабораторного контроля качества неколичественных методов иммуноферментного анализа // Справочник заведующего КДЛ. 2011. № 6. С. 9–15.

2. Нетесова И.Г., Ярославцева О.А. Проведение внутрилабораторного контроля качества неколичественных методов ИФА при наличии и отсутствии контрольных материалов // Справочник заведующего КДЛ. 2015. № 7. С. 29–36.

3. ГОСТ Р 50779.42–99 Контрольные карты Шухарта.

4. ГОСТ Р 53022.1-4–2008 Требования к качеству клинических лабораторных исследований.

5. Приказ Минздрава России от 07.02.2000 № 45 «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации».

¹ Выражаем благодарность сотрудникам представительств АО «Вектор-Бест Амур» Морозовой С.А., «Вектор-Бест Волга» Копниной Е.О., «Вектор-Бест Европа» Смердовой М.А., Кравцову А.К. за инициативу в организации проведения проектов; заместителю главного врача по лабораторной службе РЦПБ СПИД Республики Бурятии Тархаевой Л.В., главным специалистам по лабораторной диагностике: Курской области – Ухановой И.Ю., Пензенской области – Токаревой Е.В., Приморского края – Жупанской Т.В. за неоценимую помощь и поддержку в проведении семинаров по итогам проекта. Отдельная благодарность заведующим и сотрудникам лабораторий-участниц за тщательную работу по выполнению задач проекта и стремление к улучшению качества проводимых исследований. >>> вернуться в статью